ICS 11.220 B 42 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 905—2004 鸡马立克氏病强毒感染诊断技术 Diagnostic technique for virulent marek's disease virus infection of chickens 行业标准信息服务平台 2005-01-04发布 2005-02-01实施 中华人民共和国农业部 发布 NY/T 905—2004 前言 本标准的附录A和附录B都是规范性附录。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：安徽技术师范学院。 本标准主要起草人：张训海、朱鸿飞、吴延功、张忠诚、陈溥言。 行业标准信息服务平台 I NY/T 905-2004 鸡马立克氏病强毒感染诊断技术 1范围 本标准规定了马立克氏病病毒(Marek'sdiseasevirus，MDV)琼扩抗原和MDV琼扩抗体同时检测 进行鸡MDV强毒感染诊断的两种操作方法。 本标准适用于鸡马立克氏病(Marek's disease，MD)临诊鉴别诊断、MD流行病学调查、MDV强毒 感染的诊断、鸡群MDV强毒污染监测、产地和口岸检疫。 2MD琼脂免疫扩散试验检测技术与方法 该技术与方法适用于14日龄以上鸡的羽毛囊（含髓羽毛根或羽液)MDV抗原和30日龄以上鸡的 血清或羽髓液中 MDV特异抗体的检测。 2.1材料准备 2.1.1器材：1mL注射器及9号针头；1.5mL离心管；微量移液器及移液器吸头；尖头眼科摄和手术 剪；孔径3mm的打孔器。 2.1.2MDV特异琼扩阳性抗原和琼扩阳性抗体：按说明书保存与使用。 2.1.3琼脂凝胶平板的制备：见附录B。 2.2操作方法 2.2.1羽液MDV抗原和抗体的同时检测法 2.2.1.1羽液样品的制备 从被检鸡股胫外侧、胸部和背颈交界处羽区及翅羽,采集较粗大的富 含羽髓的羽毛根3根～10根。挤压出羽髓于1.5mL离心管中，离心分 离出羽液，作为试样直接检测或置于－20℃下待检。 2.2.1.2打孔 将已制备的琼脂凝胶平板放在预先画好的如图1所示的7孔梅花型 图案上，用打孔器垂直打孔，相邻孔孔边距均为3mm。用9号针头小心 剔除孔内凝胶，勿损坏孔的边缘，避免凝胶层脱离平板底部。视琼脂凝胶 平板面积可同时做多个梅花型孔。 图17孔梅花 型图案 2.2.1.3封底 用酒精灯火焰烧烤该处平板底至约70℃（可以用手腕皮肤感受至不能承受为止），以防样品溶液从 孔底侧漏。 2.2.1.4加样 用微量移液器分别在外周中的2号、3号，5号、6号孔，分别加注4份被检样品；向1号、4号孔加注 MDV特异琼扩阳性抗体/抗原。向中心孔内加注与1号、4号孔相对应的MDV特异琼扩阳性抗原/抗 体。以上孔均以加满不溢出为度。每加一个样品，应更换一个吸头。 2.2.1.5感作 将加样完毕的琼脂板加盖后，随即进行标识与记录，而后将琼脂板轻轻倒置平放在湿盒内，置于 37℃温箱中感作,24h内观察并记录结果。 2.2.2羽毛根及血清MDV抗原和血清MDV抗体的同时检测法 2.2.2.1样品的制备