ICS 65.020.20 B23 DB64 宁夏回族自治区地方标准 DB64/T16202019 紫薯脱毒原原种繁育技术规程 地方标准信息服务平台 2019 -02 -12 发布 2019-05-12实施 发布 宁夏回族自治区市场监督管理厅 地方标准信息服务平台 DB64/T1620—2019 前 言 本标准的编写格式符合GB/T1.1-2009《标准化工作导则第一部分：标准的结构和编写规则》的规 定。 本标准由宁夏农林科学院提出。 本标准由宁夏回族自治区农业农村厅归口。 本标准起草单位：宁夏农林科学院农业生物技术研究中心。 本标准主要起草人：朱金霞、李苗、郑国保、张源沛、孔德杰。 地方标准信息服务平台 地方标准信息服务平台 DB64/T1620—2019 紫署脱毒原原种繁育技术规程 1范围 本标准规定了紫薯脱毒原原种繁育技术的术语和定义、品种选择、紫薯脱毒方法、茎尖芽诱导培养、 继代增殖培养、病毒检测、试管苗扩繁、炼苗移栽、移栽管理、采苗和商品原原种苗质量标准等技术要 素。 本标准适用于宁夏地区紫薯脱毒原原种繁育技术管理的全过程。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，所注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB7413-2009甘薯种苗产地检疫规程 NY/T394-2013绿色食品肥料使用准则 NY/T1200-2006甘薯脱毒种薯 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3. 1 脱毒试管苗 应用茎尖组织培养技术获得的再生试管苗，经检测确认不带甘薯羽状斑驳病毒（SPFMV）和甘薯潜 地方标准 隐病毒（SPLV），确认为脱毒苗。 3. 2 脱毒原原种 信息服务平台 用脱毒试管苗在防虫网室条件下生产的植株，经检测确认不携带规定检测病毒且移栽后成活的植 株，用于繁育原原种苗。 4品种选择 根据当地土壤质地和气候环境选择品种，以“凌紫”为代表的紫薯品种。 5紫薯脱毒方法 主要采用紫薯茎尖分生组织培养方法。 1 DB64/T1620—2019 6茎尖芽诱导培养 6.1茎尖芽诱导培养基 以MS为基本培养基，茎尖芽诱导培养基配方见附表A.1，pH值5.8～6.0。 6.2培养基制备 将配制好的培养基溶液分装于350mL培养瓶，每瓶20mL～25mL，用带透气孔的瓶盖盖紧，在121℃ 条件下灭菌15min，冷却备用。 6.3外植体采集 选择无病虫害、品种纯正的健康植株，切取带腋芽的匍匐茎段，每2个～3个腋芽为一段，用自来 水冲洗30min后，加入1滴～2滴洗洁精，再加入无菌水至水面没过外植体，放在振荡器中摇振30min。 6.4茎尖组织的剥取、接种和芽诱导 在超净工作台上将清洗过的外植体，用75%乙醇消毒30S，用2%的NaC10溶液依据外植体的嫩老 程度浸泡8min～20min（幼嫩的外植体建议用8min～10min，稍老的外植体浸泡时间适当延长），无 菌水冲洗3次～5次后。在超净工作台解剖镜下用解剖刀挑取0.2mm～0.3mm的茎尖，接种于茎尖芽 诱导培养基培养，每瓶接种3个～4个茎尖。 6.5培养条件 温度23℃～25℃，光照强度20001x～30001x，每天光照14h～16h，培养7d～10d。 7继代增殖培养 7.1继代增殖培养基及配制 继代增值培养基配方见附表A.1，pH值5.86.0，制备方法同6.2。 7.2转接 在无菌条件下，将长至约0.5cm高的茎尖苗转接至继代培养基中进行培养，每瓶接种3个～4个茎 尖苗，培养条件同6.5，培养20d～25d后，至再生苗高为10cm～12cm 8病毒检测 8.1检测病毒种类 主要有两种病毒：甘薯羽状斑驳病毒（SPFMV）和甘薯潜隐病毒（SPLV）。 8.2病毒检测方法 病毒检测主要采用酶联免疫试剂盒检测法和植物小叶嫁接检测法。 8.2.1酶联免疫试剂盒检测法 酶联免疫试剂盒检测法，具体检测方法按NY/T1200-2006规定执行。 2 DB64/T1620—2019 8.2.2指示植物小叶嫁接检测法 选择巴西牵牛为指示植物，具体检测方法按NY/T1200-2006规定执行。 8.3抽样方法 抽样方法及数量按NY/T1200-2006规定执行。抽样后样品至于3℃～10℃存放待检测。 8.4去除带病毒株系 检测前先对茎尖脱毒组织培养试管苗进行株系标记，再进行病毒检测，根据检测结果确定无病毒株 系和病毒株系，再根据标记淘汰病毒株系和植株。 9试管苗扩繁 9.1试管苗快繁培养基及配制 试管苗快繁培养基配方见附表A.1，pH值5.8～6.0，制备方法同6.2。 9.2接种 待试管苗长至10cm～12cm时，在无菌条件下，对确认无病毒株系进行试管苗快繁。培养条件同6.5， 试管苗每20d～30d继代一次，60d繁殖系数达40倍～50倍。 10炼苗移栽 10.1炼苗 将培养瓶放置于20+5℃温室中，封口培养3d～8d，打开瓶盖后让幼苗在培养瓶中继续生长3d～5 d。 10.2移栽 10.2.1洗苗 将炼苗处理的试管苗从培养瓶中轻轻取出，放入清水中，漂洗干净表面培养基，根向下竖直放置于 盛有2cm～3cm清水的容器中，放置2h之内完成移栽。 标准不 10.2.2基地选择 选择周边500m内无甘薯及旋花科作物种植，且具有符合GB7413-2009规定的无检疫性病害和隔离 慧服务平台 条件的塑料大棚，通风处覆盖60目尼龙网。 10.2.3基质种类 选用泥炭土、蛭石和疏松土壤（泥炭土：蛭石：疏松土壤=1：1：3）的混合物为基质。 10.2.4基质消毒 脱毒试管苗移栽前40d，密闭大棚，用消毒剂（100倍福尔马林水溶液，按5kg/667m²）对基质及 棚内设施进行喷雾消毒，消毒7d～10d后，通风排除剩余消毒剂。 3