ICS 67.040 X 10 DB34 安 徽 省 地 方 标 准 DB 34/T 3213—2018 油料农产品中精喹禾灵及其代谢物喹禾灵 酸残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 Determination of quizalofop-P-ethyl and its metabolite quizalofop-acid residues in oil crops by UPLC-MS\MS 文稿版次选择 2018 - 10 - 20 发布 安徽省质量技术监督局 2018 - 11 - 20 实施 发 布 DB34/T 3213—2018 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所提出。 本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所、农业部农产品质量安全风 险评估实验室（合肥）、阜阳市农产品质量安全监测中心、池州市农产品质量安全监测中心、安徽省畜 牧技术推广总站、潜山县植物检疫保护站、潜山县痘姆乡农技站。 本标准起草人：段劲生、孙明娜、高同春、郭恒心、许四五、李瑞、王梅、董旭、褚玥、吴彩玲、 储昭才、余璐、朱玉杰、黄璠。 I DB34/T 3213—2018 油料农产品中精喹禾灵及其代谢物喹禾灵酸残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 1 范围 本标准规定了油料农产品中精喹禾灵及其代谢物喹禾灵酸残留量的液相色谱串联质谱法中的原理、 试剂与材料、主要仪器和设备、分析步骤、测定、结果计算、方法的准确度和精密度和色谱参考图。 本标准适用于油料农产品大豆、芝麻、花生中精喹禾灵及其代谢物喹禾灵酸残留量的测定。 本标准的方法定量限为 0.02 mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 5491 粮食、油料检验 扦样、分样法 GB/T 6379.1 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第1部分:总则与定义 GB/T 6379.2 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第2部分:确定标准测量方法重复性与 再现性的基本方法 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 试样用水和含 1％冰醋酸的经正己烷饱和的乙腈混合溶液提取后，经 PSA（N-丙基乙二胺）净化， 用超高效液相色谱反相分离，三重四级杆质谱仪测定，外标法定量。 4 试剂与材料 水为 GB/T 6682 规定的一级水 。以下凡是无特殊注明的试剂均为分析纯。 4.1 甲醇：色谱纯。 4.2 乙腈。 4.3 乙腈：色谱纯。 4.4 冰醋酸。 4.5 甲酸：色谱纯。 4.6 正己烷。 4.7 氯化钠。 4.8 PSA（N-丙基乙二胺）吸附剂：40-60 μm。 4.9 无水醋酸铵：色谱纯，纯度≥99％。 4.10 精喹禾灵标准品：纯度≥99％。 4.11 代谢物喹禾灵酸标准品：纯度≥99％。 1 DB34/T 3213—2018 4.12 微孔过滤膜（有机）：13 mm×0.2 μm 4.13 标准溶液 4.13.1 标准储备液：分别准确称取适量的精喹禾灵及其代谢物喹禾灵酸，用色谱甲醇配置成浓度为 1000 μg/mL 的标准储备液，于 0～4℃下避光保存。 4.13.2 混合标准储备液：分别吸取适量的精喹禾灵及其代谢物喹禾灵酸的标准储备液，用色谱甲醇配 置成浓度为 10 μg/mL 的混合标准储备液，于 0～4℃下避光保存。 4.13.3 混合标准工作液：将精喹禾灵及其代谢物喹禾灵酸的混合标准储备液，用色谱甲醇稀释，配置 成质量浓度分别为 1.0 μg/mL、0.5 μg/mL 、0.2 μg/mL 、0.1 μg/mL、0.05 μg/mL、0.02 μg/mL、0.01 μg/mL 和 0.005 μg/mL 的标准工作溶液，待用。标准工作液需现配现用。 4.13.4 基质混合标准工作液：将精喹禾灵及其代谢物喹禾灵酸的混合标准储备液，用样品空白液稀释， 配置成质量浓度分别为 1.0 μg/mL、0.5 μg/mL 、0.2 μg/mL 、0.1 μg/mL、0.05 μg/mL、0.02 μg/mL、 0.01 μg/mL 和 0.005 μg/mL 的基质混合标准工作溶液，待用。基质混合标准工作液需现配现用。 5 主要仪器和设备 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 6 超高效液相色谱串联质谱仪：配有电喷雾（ESI）离子源。 恒温振荡器。 旋转蒸发仪。 涡旋装置。 电子天平：感量 0.01 g 和 0.1 mg。 分析步骤 6.1 试样的制备与保存 按照 GB/T 5491 的规定将不少于 1000 g 样品混匀，四分法取样，放入食品加工机粉碎，过 20 mm 筛，制成试样，放入试样瓶中密封，贴上标签，并置于 -20℃条件下保存，待测。 6.2 试样处理 6.2.1 提取及净化 称取试样 l0 g（精确至 0.01 g），置于 250 mL 三角瓶中，加入 10 mL 蒸馏水，混匀后放置 0.5 h，加入 50 mL 含 1％冰醋酸的经正己烷饱和的乙腈溶液，25±2℃恒温振荡 60 min，静置 10 min， 过滤到浓缩瓶中，再用 30 mL 上述提取液提取一次，合并滤液，加氯化钠过饱和，盐析，取上层液， 40℃旋转浓缩至近干，10 mL 乙腈溶解残渣，待净化。 取 2 mL 乙腈溶解液，放入称有 150 mg PSA 的离心管中，涡旋混合 1 min ，静置 10 min，取上 清液过 0.2 μm 滤膜过滤，供 UPLC-MS\MS 测定。 6.3 测定 6.3.1 液相色谱条件 色谱柱：C18柱， 50 mm× 2.0 mm（内径）或相当，粒度 1.6 μm 或相当； 柱箱温度：40℃； 流动相：A-5mmol/L 醋酸铵的水溶液 +0.1％甲酸（V:V），B-甲醇； 2 DB34/T 3213—2018 流速：0.4 mL/min； 进样体积：5 μL； 流动相梯度洗脱程序见表1。 表1 梯度洗脱程序 流动相比例 梯度时间 /（％） /min 流动相 A 流动相 B 0.0 90 10 3.0 20 80 4.1 15 85 4.5 15 85 5.0 90 10 6.3.2 质谱条件 离子源：电喷雾离子源（ESI），450℃， 离子源接口电压：4.5 KV； 扫描方式：正离子模式； 检测方式：多反应监测 MRM； 雾化气 3 L/min、干燥气 15 L/min 均为高纯氮，碰撞气氩气 230 KPa； 脱溶剂管温度：200℃； 参考条件和定性离子对、定量离子对见表2。 表2 定性离子 碰撞电压 1 m/z m/z (V) 373.10/299.00 -11.0 -20.0 -23.0 373.10/271.15 -11.0 -25.0 -15.0 345.30/299.10 -14.0 -20.0 -22.0 345.30/228.95 -14.0 -35.0 -18.0 ESI模式 精喹禾灵 [M+H]+ 373.10/299.00 [M+H]+ 345.30/299.10 灵酸 碰撞电压 2 定量离子 名称 代谢物喹禾 MRM 检测参数 CE (V) 6.3.3 测定 取精喹禾灵、代谢物喹禾灵酸的系列混合基质标准工作溶液（4.13.4）及试样溶液各 5 μL，注入 超高效液相色谱串联质谱仪进行分析，用外标法定量。 6.4 平行试验 按以上步骤，对同一试样进行平行测定。 6.5 空白实验 除不加试样外，均按上述步骤测定。 7 结果计算 3 DB34/T 3213—2018 试样中的精喹禾灵和代谢物喹禾灵酸含量按公式(1)计算： R S  C V ................................... (1) S' m 式中： R S C V  —— 样品中残留量（mg/kg）；  —— 样液中精喹禾灵或代谢物喹禾灵酸的峰面积； —— 基质标准溶液的浓度（mg/L)； —— 样液最终定容体积（mL）； S '  —— 基质标准溶液中精喹禾灵或代谢物喹禾灵酸的峰面积； m —— 称取的试样量（g）。 注：计算结果应扣除空白值。精喹禾灵的最终残留量由精喹禾灵及其代谢物喹禾灵酸组成，以精喹禾灵计，代谢物 喹禾灵酸的残留量乘以质量系数 1.08 后计入。 8 方法的准确度和精密度 8.1 准确度 本方法在 0.02 mg/kg～2.0 mg/kg 添加浓度范围内的回收率在 75％～110％之间。 8.2 精密度 本标准精密度数据是按照 GB/T 6379.1 和 GB/T 6379.2 的规定确定的，获得重复性和再现性的值 是以 95％的可信度来计算，本标准方法的精密度数据参照附录A。 9 色谱参考图 参见附录B。 4 DB34/T 3213—2018 AA 附 录 A （资料性附录） 精喹禾灵、代谢物喹禾灵酸精密度数据表 表A.1 精喹禾灵、代谢物喹禾灵酸精密度数据表 含量 重复性限 再现性限 含量 重复性限 再现性限 （mg/kg） r R （mg/kg） r R 精喹禾灵 0.02 0.0013 0.0031 0.2 0.0081 0.0279 代谢物喹禾灵酸 0.02 0.0019 0.0024 0.2 0.0116 0.0256 名称 5 DB34/T 3213—2018 BB 附 录 B （资料性附录） 参考谱图 150000 3.60 125000 100000 3.56 精喹禾灵 75000 喹禾灵酸 50000 25000 0 0.0 0.5 1.0 图B.1 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 1.0mg/L 精喹禾灵、代谢物喹禾灵酸混合基质标准溶液色谱图 Inten. (x100,000) 299.00 8.0 7.0 6.0 5.0 4.0 3.0 2.0 1.0 0.0 200.0 271.15 308.00 225.0 250.0 275.0 图B.2 6 6.5 300.0 325.0 精喹禾灵质谱图 350.0 m/z min DB34/T 3213—2018 Inten.