ICS DB63 备案号：26483-2010 青 海 省 地 方 标 准 DB63/T 864—2009 实验室冬虫夏草蝙蝠蛾卵的孵化 技术规程 2009-12-07 发布 青海省质量技术监督局 2010-01-10 实施 发布 DB63/T 864—2009 目 次 前言...................................................................................II 1 范围..................................................................................1 2 规范性引用文件........................................................................1 3 术语与定义............................................................................1 4 常用设备..............................................................................1 5 虫草蝙蝠蛾卵的采集....................................................................1 6 虫草蝙蝠蛾卵的清选....................................................................2 7 虫草蝙蝠蛾受精卵的孵化................................................................2 I DB63/T 864—2009 前 言 本规程由青海省畜牧兽医科学院提出并归口。 本规程起草单位：青海省畜牧兽医科学院草原研究所。 本规程起草人: 徐海峰、张宗豪、刘欣、马少丽、李玉玲。 II DB63/T 864—2009 实验室冬虫夏草蝙蝠蛾卵的孵化技术规程 1 范围 本规程规定了实验室冬虫夏草寄主——虫草蝙蝠蛾卵的采集、清选、孵化和日常管理等技术措施。 本规程适用于实验室人工饲养冬虫夏草寄主昆虫——虫草蝙蝠蛾卵的孵化，也适用于实验室人工饲 养分布于青藏高原的其它冬虫夏草寄主昆虫卵的孵化。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的 修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 DB63/T 668-2007《实验室冬虫夏草寄主幼虫的人工饲养技术规程》 3 术语与定义 下列术语与定义适用于本规程。 3.1 虫草蝙蝠蛾（Hepialus armoricanus Oberthur） 虫草蝙蝠蛾隶属鳞翅目（Lepidoptera）蝙蝠蛾科（Hepialidae）蝠蛾属(Hepialus Fabricius)昆 虫，是冬虫夏草的主要寄主昆虫之一。 3.2 受精卵 是指虫草蝙蝠蛾雌雄成虫交配后雌虫所产的虫卵。 3.3 未受精卵 是指虫草蝙蝠蛾雌雄成虫未交配而雌虫产的虫卵。 3.4 成虫笼 是指一种自制的用于虫草蝙蝠蛾成虫交配、产卵的木制或铁制笼子。 3.5 继代饲养 是指在人工饲养条件下，进行从卵→幼虫→蛹→成虫→卵的驯化饲养。 3.6 培育密度 是指在Ф9cm培养皿中摆放受精卵的数量。 3.7 孵化期 是指受精卵开始孵化到孵出幼虫所经历的时间。 4 常用设备 控温控湿设备、常规杀菌和消毒设备、昆虫捕虫网、成虫笼、羊毫细毛笔、Ф9cm培养皿等。 1 DB63/T 864—2009 成虫笼的尺寸按照DB63/T668-2007《实验室冬虫夏草寄主幼虫的人工饲养技术规程》执行。 5 虫草蝙蝠蛾卵的采集 5.1 野外直接采集虫草蝙蝠蛾虫卵 每年七月，在野外虫草蝙蝠蛾成虫交配产卵的季节，用昆虫捕虫网将其雌雄成虫捕到成虫笼中交配 、 产卵，然后将卵收集起来带回室内。 5.2 室内采集虫草蝙蝠蛾虫卵 从野外挖回虫草蝙蝠蛾的蛹或继代饲养的蛹，在室内羽化后，将雌雄成虫按1:2.5比例的放入成虫 笼中进行交配、产卵。 6 虫草蝙蝠蛾卵的清选 孵化前剔除虫卵中的未受精卵、成虫的残翅或断腿，清选后的受精卵应及时进行孵化。 受精卵与未受精卵在外部形态上的区别见表1。 表 1 表 1 受精卵与未受精卵在外部形态上的区别 外观 受精卵 未受精卵 颜色 黑色 大多为黑色，部分为乳白色 形状 圆形或椭圆形 两端细尖 饱满程度 饱满 不 饱满且蜕裂线明显下凹 松散程度 松散，不粘连 大多粘连成小团 7 虫草蝙蝠蛾受精卵的孵化 7.1 受精卵的消毒 在无菌的环境中，将受精卵放入1‰升汞溶液（HgCl2）中浸泡3分钟，取出后，用无菌水冲洗3次 ， 再用无菌细纱布或无菌吸水纸吸干卵表面的水分。随后用柔软、纤细的羊毫细毛笔沾少许无菌水将卵粘 在笔尖上，摆放在铺有潮湿滤纸的无菌培养皿（Ф9cm）中。 7.2 培育密度 每个培养皿（Ф9cm）内摆放100粒～150粒卵。 7.3 孵化环境 孵化环境为无菌黑暗环境，应保持环境温、湿度相对恒定。 环境温度 15℃～18℃ 空气相对湿度 70%～80% 7.4 日常管理 7.4.1 认真做好孵化室的日常消毒工作，严格执行无菌操作，杜绝杂菌污染。 7.4.2 工作人员进入孵化室，必须穿戴经消毒的衣、帽、鞋及口罩。 7.4.3 每天分早、中、晚三次检查培养皿中滤纸的湿度，添加无菌水保持滤纸潮湿，其湿润程度以不 能见明水为原则。 7.4.4 孵化用的培养皿、羊毫细毛笔、蒸馏水等器具都要进行灭菌处理，做到所用器具在使用前、后 都要进行彻底的灭菌。 7.5 孵化期 虫草蝙蝠蛾受精卵的孵化期为28d～34d，当孵化进行到第25d时，应在培养皿中加入经消毒处理的 饲料。或者孵化出幼虫后，每天把刚孵化出的幼虫用羊毫细毛笔尖沾少许无菌水将幼虫粘在笔尖上，移 入事先准备好的放有饲料及潮湿滤纸的培养皿中。移动初孵幼虫时，应尽量让其自己爬上、爬下笔尖， 避免笔尖戳伤幼虫。 幼虫饲养按照DB63/T 668-2007《实验室冬虫夏草寄主幼虫的人工饲养技术规程》执行。 2