Ｉ ＣＳ　 ６５． １２０ ＤＢ１３ Ｂ　４６ 河　　　　 北　　　　 省　　　　 地　　　　 方　　　　 标 准 ＤＢ１３／Ｔ　 １０９８－ ２００９ 饲料中蛋白质的测定 ２００９－０６－１ ７发布 ２００９－０７－０２实施 河 ｊ匕省 质 量 主ｖ ＿术 监 督 局 　　发 布 ＤＢ１３／ Ｔ　 １０９８－ ２００９ 前 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 ￣￣月巨￣ 口 习 　　　　　　　　　　　　　　　　　　 本标准由河北省畜牧兽医局提出。 本标准起草单位：河北省饲料产品质量监督检验站、河北农业大学。 本标准主要起草人：武英利、王萍、赵国先、李海龙、霍韶瑜、武利勇。 ＤＢ１３／ Ｔ　 １０９８－ ２００９ 饲料中蛋白质的测定 范围 本标准规定了饲料中蛋白质 （ 俗称真蛋白质）的测定方法。 本标准适用于饲料蛋白原料、浓缩饲料和配合饲料中蛋白质 （ 俗称真蛋白质）的测定。 ２ 规范性引用文件 下列文件通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注明日 　　　　 期的引用文件，其随后所有的修改 单 （ 不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是 否可使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 ＧＢ／ Ｔ　 ６ ０１ －２ ０ ０２ 化学试剂　　 标准滴定溶液的制备 ＧＢ／ Ｔ　 ６ ４ ３ ２ －１ ９９ ４ 饲料粗蛋白质测定方法 　　　　 　　　　 ＧＢ／ Ｔ　 ６６８２－ ２００８ 分 析 实 验 室 用 水 规 格 和 试 　　　　 验方 法 ３ 原理 试样水溶液经煮沸后在碱性条件下加人硫酸铜溶液使蛋白 　　　　 质变性凝结而沉淀，用热水洗涤沉淀， 得到的沉淀物再用凯氏定氮的方法测定其含氮量，然后，将结果乘以６． ２５即为试样的蛋白质含量。 ４ 仪器和设备 ４． ， 分析天平：感量为０ ． ０ ０ ０　 １　 ｇ ４． ２ 样品粉碎机。 ４． ３ 分析筛 ：孔径０． ５０　 ｍｍ　 ｏ ４． ４ 电炉：温度可调１ 　 ５ ０ ０　 Ｗ＇２　 ０ ０ ０　 Ｗ或消煮炉：４１ ０土５ｃ Ｃｏ ４． ５ 刻度吸管，５　 ｍＬ， 　 １ ０　 ｍＬｏ ４． ６ 烧杯，２ ５ ０　 ｍＬｏ ４． ７ 三角漏斗。 ４． ８ 中速定量滤纸：直径９　 ｃ ｍ－１１ 　 ｃ ｍｏ ４． ９ 电热式恒温干燥箱：可控温度７ ５土２９ Ｃ０ 　 ４． １ ０ 凯氏烧瓶：１ ０ ０　 ｍＬ或２５ ０　 ｍＬ或消解管。 ４． １１ 凯氏蒸馏装置或定氮仪 （ 以凯氏定氮原理制造的各种类型半自动、全自动蛋白测定仪） 。 ４． １ ２ 锥形瓶，２ ５０　 ｍＬｏ ４． １ ３ 酸式滴定管，２ ５　 ｍＬｏ ５ 试荆 方法中 　　　　 所用试剂，除另有规定外均为分析纯试剂，所用水应符合ＧＢ／ Ｔ　 ６ ６ ８２ 三级以上用水要求。 ５． １ 浓硫酸，无氮。 ５． ２ 五水硫酸铜 （ Ｃｕ ＳＯ４ ． ５Ｈ２ Ｏ　 ） ５． ３ 无水硫酸钠或无水硫酸钾 。 ５． ４ 氢氧化钠。 ＤＢ１３／Ｔ　 １０９８－ ２００９ ５． ５ 硼酸。 ５． ６ 甲基红。 ５． ７ 澳甲酚绿。 ５． ８ 乙醇，９ ５％０ ５． ９ 盐酸。 ５． １ ０ 氯化钡。 ６ 溶液 ６． ， 混合催化剂 称取０． ４　 ｇ 五水硫酸铜， 　　　　 ６ｇ 无水硫酸钠或无水硫酸钾，研碎混匀。 ６． ２ 复教化钠溶液，浓度４ ０ ０睡 称取氢氧化钠４ ０ ０． ０　 ｇ，加水１ 　 　　　　 ０ ０ ０　 ｍＬ溶解，摇匀。 ６． ３ 硼酸溶液，浓度２ ０　 ｇ ／ Ｌ 称取硼酸２ ０． ０　 ｇ，加水１ 　 　　　　 ０ ０ ０　 ｍＬ溶解，摇匀。 ６． ４ 混合指示剂 甲基红乙醇溶 　　　　 液（ １叭） ：称取甲基红０ ． １ ０　 ｇ ，加乙醇１ ０ ０　 ｍＬ 溶解，摇匀； 澳甲酚绿乙醇溶液 （ ５昨 ）：称取甲基红０ ． ５ ０　 ｇ，加乙醇１ ０ ０　 ｍＬ溶解，摇匀； 　　　　 上述两溶液等体积混合或按照仪器要求配制，阴凉处保存期为３ 个月。 　　　　 ６． ５ 氮舰化钠溶液，浓度２ ５叭 称取氢氧化钠２ ． ５　 ｇ，加水溶解定容至１ 　　　　００　 ｍＬ，摇匀。 ６． ６ 硫酸铜溶液，浓度１ ０ ０　 ｇ ／ Ｌ 称取五水硫酸铜１ ０． ０　 ｇ，加水溶解定容至１ 　　　　 ００　 ｍＬ，摇匀。 ６． ７ 盐酸标准滴定溶液，浓度０． １ 　 ｍｏ ＵＬ 按ＧＢ／ Ｔ　 ６ ０１ 的规定制备、标定。 　　　　 ６． ８ 抓化钡溶液，浓度５０叭 称取氯化钡５． ０　 ｇ，加水１ ０ ０ 　　　　 　 ｍＬ溶解，摇匀。 ７ 试样的选取和制备 选取具有代表性的试样， 　　　　 用四分法缩减至２ ０ ０　 ｇ，粉碎至０． ５ ０　 ｍｍ，装人密封容器中备用。 ８ 分析步骤 ８． １ 准确称取试样０ ． ５　 ｇ －　 １ 　 ｇ，放人２ ５ ０　 ｍＬ 烧杯中，加水７ ５　 ｍＬ，搅匀；置于电炉上加热煮沸３ ０　 ｍｉ ｎ， 期间应不断搅拌，并补加热水以保持水溶液体积不少于７ ５　 ｍＬｏ 　 ８． ２ 将煮过的试样溶液稍冷，慢慢滴加２　 ｍＬ氢氧化钠溶液 （ ６． ５），边加边缓慢搅拌，使试样溶液呈碱 性，然后，慢慢滴加５　 ｍＬ硫酸铜溶液，边加边缓慢搅拌。重复上述操作三次，每次加人氢氧化钠溶液 （ ６ ． ５） 　 ６　 ｍＬ，硫酸铜溶液５　 ｍＬ。静置陈化２ｈ以上或过夜。 ８． ３ 沉淀用中速定量滤纸采用倾泻法过滤，沉淀用８ ０℃以上的热水洗涤７－１ ０次，直至用氯化钡溶液 检验滤液无沉淀或浑浊产生为止。沉淀物连同滤纸置７ ５ ℃干燥箱中干燥１ 　 ｈａ ８ ． ４ 干燥后的沉淀物连同滤纸放人凯氏烧瓶 （ 或消化管）中，加人巧ｍＬ 浓硫酸，６ ． ４　 ｇ 混合催化剂， 按照ＧＢ／ Ｔ　 ６ ４ ３ ２的规定进行消解并测定其中氮的含量。同时做空白试验。 ８． ５ 结果计算与表述 ８． ５． １ 结果计算 ＤＢ１ 　３／Ｔ　 １０９８－ ２００９ 蛋白质含量按 （ １）式进行计算： （ Ｖ２一Ｖ１ ）ｘ　 Ｃ　 ｘ　 ０． ０ １ ４ ０“６． ２ ５ ｘ　 １００ （１） Ｍ 式 中： 　　　　　　 Ｐ —　　　　 蛋白质含量 ，％； Ｖ，— Ｖ２— 空白消耗盐酸标准滴定溶液体积， 　　　　 ｍＬ； 试样消耗盐酸标准滴定溶液体积，ｍＬ； 　　　　 Ｃ — 盐酸标准滴定溶液浓度 ，ｍｏ ＵＬ； Ｍ — 试样质量，ｇ； ０． ０１ ４ ０— 每毫摩尔氮的克数； 　　　　 ６ ． ２５— 　　　　 　　　　 氮换算成蛋白质的平均　　　　 系数 。 ８． ５． ２ 结果表述 每个样品应取２ 　　　　 份平行样进行测定，以其算术平均值为分析结果，结果保留两位小数。 ９ 重复性 当蛋白 　　　　 质含量在１ ０％以上时，允许相对偏差不超过２ ％；当蛋白质含量在１ ０ ％以下时，允许相对偏 差不超过３％０