ICS 65.120 B 46 DB13 河 北 省 地 方 标 准 DB13/T 1444—2011 饲料添加剂 葡萄糖氧化酶 2011 - 09 - 05 发布 河北省质量技术监督局 2011 - 09 - 15 实施 发 布 DB13/T 1444—2011 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由河北省科学院提出。 本标准起草单位：保定鲜尔康生物工程有限责任公司、河北省饲料产品质量监督检验站、保定市 标准化所、河北省科学院。 本标准起草人：王卫国、米振杰、武英利、李海龙、李惠玉、唐金金、辛春艳。 I DB13/T 1444—2011 饲料添加剂 葡萄糖氧化酶 1 范围 本标准规定了饲料添加剂葡萄糖氧化酶的术语和定义、要求、试验方法、检验规则和标志、包装、 运输、贮存。 本标准适用于以特异青酶（Penicillium notatum）为生产菌种，发酵生产的葡萄糖氧化酶制剂。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 601 化学试剂 标准滴定溶液的制备 GB/T 603 化学试剂 试验方法中所用制剂及制品的制备 GB/T 5917.1 饲料粉碎粒度测定 两层筛筛分法 GB/T 6435 饲料中水分和其他挥发性物质含量的测定 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 9724 化学试剂pH值测定通则 GB 10648 饲料标签 GB/T 13079 饲料中总砷的测定 GB/T 13080 饲料中铅的测定 原子吸收光谱法 GB/T 13082 饲料中镉的测定方法 GB/T 13091 饲料中沙门氏菌的检测方法 GB 4789.3－2010 食品安全国家标准食品微生物学检验 大肠菌群计数 GB/T 17480－2008 饲料中黄曲霉毒素B1的测定 酶联免疫吸附法 GB/T 13093 饲料中细菌总数的测定 GB/T 14699.1 饲料采样 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 葡萄糖氧化酶活力单位 在 pH 5.6 的磷酸缓冲液、30℃温度的条件下，每分钟催化氧化 1 µmol 葡萄糖转化为葡萄糖酸的 酶的量，为一个酶活力单位，以 GODU 表示。 4 4.1 要求 感官指标 1 DB13/T 1444—2011 4.1.1 固体剂型：为黄棕色粉末，色泽一致，无结块，气味微酸、无其它异味； 4.1.2 液体剂型：为淡黄至浅棕色半透明液体，气味微酸、无其它异味。 4.2 理化指标 应符合表 1 规定。 表1 理 化 要 求 要 项 固体 目 畜禽用 指标（酶活力） 水产动物用 15 GODU/g 液体 反刍动物用 所有动物用 12 GODU/g 15 GODU/mL 酶活力为标示值的≥（％） 85 干燥失重（％）≤ 细度（通过 0.45 mm 分析筛％） ≥ 12.0 80 85 pH 值 4.3 求 _______ 80 _______ 4.6－5.4 4.4－5.4 卫生指标 应符合表 2 规定 表2 项 目 生 指 标 要 固 体 求 液 体 砷，mg/kg ≤ 3.0 3.0 铅（以 Pb 计），mg/kg ≤ 8.0 5.0 镉（以 Cd 计），mg/kg ≤ 0.5 0.5 不得检出 不得检出 大肠菌群（个/100 g）≤ 3000 3000 黄曲霉毒素 B1（µg/kg）≤ 0.1 沙门氏菌 细菌总数（cfc/g）或（cfc/ml）≤ 5 卫 0.1 5×10 5 5×104 试验方法 本标准所用试剂除特殊表明外，均为分析纯。所用水均应符合 GB/T 6682 中三级水规格。所需的标 准溶液，没有表明时，均按 GB/T 601、GB/T 603 规定的方法制备。 5.1 试剂和溶液 5.1.1 葡萄糖磷酸缓冲液（20 g/L）：称取 20 g 无水葡萄糖，用 0.06 mol/L pH5.6 磷酸缓冲液溶解， 定容至 1 000 mL。 5.1.2 NaOH 标准滴定溶液（0.1 mol/L）。 5.1.3 HCL 标准滴定溶液（0.1 mol/L）。 2 DB13/T 1444—2011 5.1.4 酚酞指示剂（10 g/L） 称取酚酞 1 g 溶于 100 ml 90％乙醇中。 5.1.5 磷酸缓冲液（0.06 mol/L pH 5.6） NaH2PO4 ·2H2O 溶液：称取 NaH2PO4 ·2H2O 9.36 g，加水溶解，定容至 1 000 mL，摇匀即可； Na2HPO4·12H2O 溶液：称取 Na2HPO4·12H2O 21.48 g，加水溶解，定容至 1 000 mL，摇匀即可； 取上述 NaH2PO4 ·2H2O 溶液和 Na2HPO4·12H2O 溶液按 20:1 比例混合，用 NaH2PO4 ·2H2O 溶液 或 Na2HPO4·12H2O 溶液调 pH 值至 5.6 即可。 5.2 仪器设备 5.2.1 5.2.2 5.2.3 5.2.4 5.2.5 5.3 分析天平, 感量 0.01 g。 磁力搅拌器。 pH 计：精度为 0.01 单位。 分样标准筛：孔径 0.45 mm。 恒温水浴震荡器：温差±0.2℃，震荡频率 50～220 rpm。 pH 测定 固体产品取样 10 g 加 50 ml 水摇匀，浸 30 分钟，用滤纸过滤，取上清液按 GB/T 9724 规定 的方法测定。 b) 液体产品直接按 GB/T 9724 规定的方法测定。 a) 5.4 干燥失重的测定 称取试样约 5 g，按照 GB/T 6435 中 8.2 的规定测定。 5.5 细度测定 按照 GB/T 5917 的规定执行。 5.6 砷含量的测定 按照 GB/T 13079 规定执行。 5.7 铅含量的测定 按照GB/T 13080规定执行。 5.8 镉含量的测定 按照 GB 13082 规定执行。 5.9 饲料中沙门氏菌的测定 按照 GB/T 13091 规定执行。 5.10 大肠菌群计数 按照 GB 4789.3－2010规定执行。 5.11 饲料中黄曲霉毒素 B1 测定 3 DB13/T 1444—2011 按照 GB/T 17480－2008 规定执行。 5.12 细菌总数的测定 按照 GB/T 13093 规定执行。 5.13 葡萄糖氧化酶测定 5.13.1 原理 葡萄糖氧化酶是一种需氧脱氢酶，能催化氧化葡萄糖生成葡萄糖酸。用过量的氢氧化钠中和产生的 葡萄糖酸，再用盐酸返滴定，即可求得葡萄糖酸的产量，根据产葡萄糖酸量表示酶活力高低。 5.13.2 测定方法 取固体产品10.00 g置250 mL锥形瓶中。准确加入适量蒸馏水稀释,使酶液浓度控制在2.4～3.5 U/mL 范围（记录稀释倍数f）。搅拌摇匀后于4～8℃冰箱中浸提15～16小时，用中性快速滤纸或细绸布过滤， 滤液作为测定液；准确量取液体产品，用适量蒸馏水稀释，使酶液浓度控制在2.4～3.5 U/mL范围（记 录稀释倍数f），作为测定液。 取2％葡萄糖磷酸缓冲液25.00 mL置250 mL锥形瓶中，于恒温摇床上30℃、150 rpm预热3分钟，准 确加入上述测定液1.00 mL，立即置恒温摇床上，30℃、150 rpm振荡反应60分钟取出（准确计时）；立 即准确加入0.1 mol/L的氢氧化钠溶液20.00 ml，振摇终止反应；加酚酞指示剂1滴，用0.1 mol/L盐酸 滴定剩余的氢氧化钠，记录所消耗的盐酸毫升数A。 空白对照，取2％葡萄糖磷酸缓冲液25.00 mL置250 mL锥形瓶中，准确加入0.1 mol/L的氢氧化钠溶 液20.00 ml，摇匀，再准确加入酶液1.00 mL，酚酞指示剂1滴，用0.1 mol/L盐酸滴定剩余的氢氧化钠， 记录所消耗的盐酸毫升数B。 5.13.3 计算 葡萄糖氧化酶活力单位(GOD/g 或 mL)= （B − A）× N × f × 1000 60 (1) 式中： A----反应后消耗的盐酸（mL）； B ----反应前消耗的盐酸（mL）； N----盐酸摩尔浓度（mol/L）； f-----稀释倍数 60----为反应 60 分钟，按分钟计； 6 检验规则 6.1 出厂检验 6.1.1 每批产品应有企业质量检验部门进行出厂检验，检验合格后签发合格证出厂。 6.1.2 出厂检验项目 a) b) 6.2 固体剂型：感官指标、酶活力、干燥失重、细度、pH 值、细菌总数。 液体剂型：感官指标、酶活力、pH 值、细菌总数。 型式试验 4 DB13/T 1444—2011 6.2.1 型式检验项目为本标准第 4 章规定的全部项目。 6.2.2 有下列情形之一时，应进行型式检验： a) b) c) d) e) 6.3 新产品定型投产时； 原料、加工工艺有调整可能影响产品质量时； 连续正常生产每年进行一次； 停产或转产半年又继续生产时； 上级质检部门提出型式检验要求时。 组批抽样 6.3.1 组批 以每一班次生产的、同一质量规格、同一包装的产品为一批。 6.3.2 采样方法 按照 GB/T 14699.1 规定的方法进行。 6.4 判定规则 检验结果全部指标符合标准要求，判定该批产品合格。如果检验结果中有一项指标不符合标准要求 时，应重新抽样进行复检。复检取样范围或样品数量是第一次的两倍，复检结果中仍有指标不合格时， 则判定整批产品不合格。卫生指标不合格不得进行复检。 7 标志、包装、运输、贮存 7.1 标志 7.1.1 包装标志 产品外包装需注明：品名、规格、注册商标、生产厂家等，并采用鲜明的饲料标签和检验合格证。 7.1.2 标签 产品标签应符合 GB 10648 之规定。 7.2 包装 内包装为塑料膜或瓶（桶），外包装为复合纸袋或纸箱，也可按用户要求包装。 7.3 运输 在运输过程中应防雨、防潮、防晒，装卸时应轻拿轻放。 7.4 贮存 产品贮存在清洁、阴凉、干燥的库房中，严禁与有毒、有腐蚀性物品和其它污染物混装、混贮。液 体产品可贮存在4～8℃或常温条件下。 7.5 保存期 5 DB13/T 1444—2011 在规定的贮运和包装条件下，原包装从生产之日起液体产品（4～8）℃为 12 个月，常温下为 6 个月。固体产品常温下为 12 个月。 _________________