DB35 福 建 省 地 方 标 准 DB35/T 895-2009 环境样品中甲基汞、乙基汞及无机汞高效 液相色谱-电感耦合等离子体质谱法 （HPLC-ICP-MS）测定 2009-03-11 发布 福建省质量技术监督局 2009-04-01 实施 发布 DB35/T 895-2009 前 言 本标准的附录A为资料性附录。 本标准由福建省质量技术监督局提出并归口。 本标准由福建省质量技术监督局批准。 本标准起草单位：福建省中心检验所。 本标准主要起草人：黄红霞、郑小严、王征、林钦、邱秀玉、游飞明 本标准系首次发布。 I DB35/T 895-2009 环境样品中甲基汞、乙基汞及无机汞高效液相色谱-电感耦合等离子体 质谱法（HPLC-ICP-MS）测定 1 范围 本标准规定了高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法（HPLC-ICP-MS）测定环境样品中甲基汞、乙 基汞、无机汞含量的方法。 本标准适用于地表水、生活饮用水、生活污水、工业废水 、藻类、鱼体中甲基汞、乙基汞及无机汞 含量的测定。 本标准方法对地表水、生活饮用水、生活污水、工业废水样品中三种形态的汞方法检测限（μg/L）分 别为：甲基汞 0.05；乙基汞 0.1；无机汞 0.1。在试样取样量为 2.0g，定容体积为 50mL 时，本标准方法对 藻类及鱼体样品中三种形态的汞方法检测限（mg/kg）分别为：甲基汞 0.03；乙基汞 0.05；无机汞 0.05。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修 改单（不包括勘误的内容）或修改版均不适用于本标准；然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否 使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 5750.2-2006 生活饮用水标准检验方法 水样的采集和保存 3 原理 试样处理后，待测液经高效液相色谱将三种形态的汞分离，再逐一进入电感耦合等离子体质谱仪，在 等离子体的高温作用下，经去溶剂化、原子化、离子化进入检测器，其元素信号强度 CPS（Count Per Second） 值与样品中被测物的浓度成正比，通过 CPS 值测定试样中三种形态汞的含量。 4 试剂 4.1 所用的玻璃器皿均需用 20%硝酸浸泡 12 小时以上，用水反复冲洗干净。所有试验用水均为 GB/T 6682 规定的一级水。 4.2 2-巯基乙醇：分析纯。 4.3 盐酸：优级纯。 4.4 氨水：优级纯。 4.5 甲醇：色谱纯。 4.6 乙酸铵：分析纯。 4.7 盐酸溶液（体积百分比 10%）：取 10mL 盐酸（4.3），用水稀释到 100mL。 4.8 氨水溶液（体积百分比 10％）：取 10mL 氨水（4.4），用水稀释到 100mL。 4.9 盐酸溶液（体积百分比 2%）：取 2mL 盐酸（4.3），用水稀释到 100mL。 4.10 巯基乙醇溶液（体积百分比 10%）：取 10mL 巯基乙醇（4.2），用水稀释到 100mL。 4.11 氯化甲基汞：纯度大于 98.5%。 4.12 氯化乙基汞：纯度大于 98.0%。 2+ 4.13 无机汞(Hg )标准溶液（1000mg／L）：选用相应浓度的有证标准溶液。 4.14 甲基汞、乙基汞的混合标准储备液（100mg/L）：准确称取 100.0mg 甲基汞、乙基汞标准品，用盐酸 溶液（4.9）溶解后定容到 1000mL，配制成 100mg/L 的标准储备液，在 0℃～4℃避光保存，保质期为 3 个 月。 1 DB35/T 895-2009 4.15 三种形态的汞混合标准使用液（0.1mg/L）：吸取甲基汞、乙基汞的标准储备液（4.14）1.0mL，无 2+ 机汞(Hg )标准溶液（4.13）0.1 mL，用水定容到 1000mL用水，配制成 0.1mg/L的标准使用液，现配现用。 4.16 质谱调谐液：推荐选用 Li、Y、Ce、Tl、Co 为质谱调谐液，混合溶液 Li、Y、Ce、Tl、Co 的浓度为 10ng/mL，介质为 2％的硝酸。 4.17 流动相配制：称取乙酸铵（4.6）2.31g 于 500mL 容量瓶中，分别加入 25mL 甲醇（4.5），0.5mL2巯基乙醇（4.2），再用水稀释到 500mL。用 10％氨水溶液（4.8）调节 pH 到 6.8。 4.18 三种形态的汞的混合标准工作溶液：吸取 0，0.20，0.50，5.00，10.0，50.0mL 三种形态的汞标准 使用液（4.15），分别置于 100mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。根据待测形态汞元素的实际含量， 可在 0.0002 mg/L ~0.050 mg/L 范围内选取合适的工作曲线范围。 5 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 5.6 5.7 6 仪器与设备 电感耦合等离子体质谱仪。 高效液相色谱仪。 绞肉机：应确保不带来汞污染。 离心机：转速不低于 4000 r/min。 冷冻干燥机。 超声振荡器：频率 40kHz，功率 600W。 分析天平（感量 0.0001g 和 0.1g）。 取样及试样制备 6.1 水样取样和制备按 GB/T 5750.2-2006 规定执行。 6.2 抽取鱼肉样品可食部分制备，用绞肉机绞碎，充分均匀，密封，作为试样，标明标记。 6.3 抽取藻类样品可食部分，沥干，切碎，混匀，密封，作为试样，标明标记。 7 分析步骤 7.1 试样预处理 水样的处理：取水样约 20mL 以 3000r/min～4000r/min 离心 5min，取上清液用 0.45μm 醋酸纤维滤膜 过滤，再取 5.00mL 预滤液用盐酸溶液（4.9）或氨水溶液（4.8）调节 pH 到 6.8，加水定容到 10.00mL，同 时做空白试验。 藻类试样预处理：称取试样 1.00g~2.00 g 放入 50mL 塑料离心管，在冷冻干燥机上冻干试样后，再缓 慢加入盐酸溶液（4.7）19mL，边加边搅拌至不产生气泡为止，再加入 1.00mL 巯基乙醇溶液（4.10），搅 拌 2min，超声振荡提取 1.0 小时，再以 3000r/min～4000r/min 离心分离 5min，取上层澄清溶液 5.00mL 到 50mL 的聚乙烯瓶中，用 10％的氨水溶液（4.8）调节 pH 到 6.8，最后加水定容到 50mL。进样前用 0.45μm 醋酸纤维滤膜过滤，同时做空白试验。 鱼样预处理：称取试样 1.00g~2.00 g 样品放入 50m L 塑料离心管，在冷冻干燥机上冻干试样后，再缓 慢加入盐酸溶液（4.7）18mL，边加边搅拌至不产生气泡为止，再加入 2.00mL 巯基乙醇溶液（4.10），搅 拌 2min，超声振荡提取 1.0 小时，再以 3000 r/min～4000r/min 离心分离 5min，取上层澄清溶液 5.00mL 到 50mL 的聚乙烯瓶中，用 10％的氨水溶液（4.8）调节 pH 到 6.8，最后加水定容到 50mL。进样前用 0.45μm 醋酸纤维滤膜过滤，同时做空白试验。 7.2 测定 7.2.1 液相色谱条件 a）色谱柱：C18（含碳量大于17%）5μm，2.1×50mm（内径）或相当者。 b）流动相：见（4.17）。 c）流速：0.3mL/min。 d）进样量：50μL。 e）柱温：30℃。 2 DB35/T 895-2009 7.2.2 电感耦合等离子体质谱条件 以10μg/L 的Li、Y、Ce、Tl质谱调谐液（4.16）对仪器条件进行优化，工作条件及参数见表1。检测的 质量数为202Hg 7.2.3 定量测定 将三种形态的汞的混合标准工作溶液（4.18）分别进样，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标 准工作曲线，用标准工作曲线对试样进行定量，试样溶液中甲基汞、乙基汞、无机汞的响应值均应在仪器 测定的线性范围内。在上述仪器条件下，甲基汞、乙基汞、无机汞标准物质液总离子流图见图A.1。 表1 电感耦合等离子体质谱仪（ICP-MS）的参考工作条件及参数 参数 数值 参数 数值 RF 功率 1480 w 蠕动泵转速 0.2 r/min 采样深度 7.0 mm 辅助气流速 0.40 L/min 载气流速 0.60 L/min （本方法条件为参考条件，可根据不同仪器、色谱柱进行调整，但甲基汞、乙基汞、无机汞色谱峰应能有 效分离，分离度R≥1.0） 8 结果计算 水样中三种形态汞含量按式（1）进行计算： Xi = Ci × 10 1 × 5 1000 …………………………（1） 式中： Xi——试样中某种形态汞浓度，单位为毫克每升（mg/L）； Ci——由工作曲线算出的试样溶液中某种形态汞的浓度，单位为微克每升（μg/L） 。 藻类和鱼肉样品按式（2）进行计算： Xj= C j × V 20 1000 × × m 5 1000 …………………………（2） 式中： Xj——试样中某种形态汞浓度，单位为毫克每千克（mg/kg）； Cj——由工作曲线算出的试样溶液中某种形态汞的浓度，单位为微克每升（μg/L） ； V——萃取液定容的体积，单位为毫升（mL）； m——样品的质量，单位为克（g）。 计算结果保留 2 位有效数字。 9 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值，某种形态汞含量在 0.0002 mg/kg ~0.01mg/kg（或 mg/L）范围，不得超过算术平均值的 20%；某种形态汞含量在 0.01mg/kg ~1.00mg/kg（或 mg/L）范围，不 得超过算术平均值的 15%。 3 DB35/T 895-2009 录 A DB35/T 895－2009 附 （规范性附录） 标准物质总离子流图 甲基汞、乙基汞、无机汞(Hg2+)标准物质总离子流图，见图A.1 1——甲基汞，2.32min； 2——无机汞，2.90min； 3——乙基汞，6.30min。 表 A.1 甲基汞、乙基汞、无机汞标准物质总离子流色谱图 福 建 省 地 方 标 准 环 境 样 品 中 甲 基 汞 、 乙 基 汞 及 无 机 汞 高 效 液 相 色 谱 － 电 感 耦 合 等 离 子 体 质 谱 法 （ HPLC-ICP-MS） 测 定 DB35/T 895—2009 * 2009 年 3 月第一版 4 2009 年 4 月第一次印刷