ICS 65. 020. 30 B 43 DB1 3 冫pi 卜』 ．『刁 、钾竺，． 省 地 标 、 万 味七 ，比 DB 13/ T 1213- 2010 奶牛性控冻精输精和 性控胚胎移植操作规程 2010-05-04实施 2010-04-19发布 河北省质量技术监督局 发布 DB13/ T 1213- 2010 月 I J 吕 本标准按照GB1. 1-2009给出的规则起草。 本标准由河北省畜牧兽医局提出。 本标准起草单位：河北省畜牧兽医研究所。 本标准主要起草人：安永福、桑润滋、平凡、李林、徐华、邳明伟、邳静伟、刘春红、郑国强、侯 井锋、王庆勇、张克菊 DB13/ T 1213- 2010 奶牛性控冻精输精和性控胚胎移植操作规程 范围 本标准规定了奶牛性控冻精和性控胚胎的术语和定义，性控冻精的质量、保存和运输，性控冻精授 精母牛的选择，性控冻精的输精操作，性控胚胎的移植操作。 本标准适用于奶牛养殖场（小区）、人工授精站（点）对奶牛应用性控冻精输精和进行性控胚胎移 植时的操作。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 4143-2008牛冷冻精液 GB/T 5458-1997液氮生物容器 NY/T 1335-2007牛人工授精技术规程 NY/T 1445-2007奶牛肝胎释植枯术规程 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3. 1 性控冻精 通过精子分离技术使奶用种公牛的X. Y精子得到有效的分离，将分离后得到的X精子进行分装 冷冻制成的冷冻精液制剂。 3. 2 性控胚胎 应用性别鉴别技术筛选出的可用于移植的奶牛胚胎。 4性控冻精的质量、保存和运输 4. 1质量 性控冻精除每剂的有效精子数不低于200万个、其中X精子含量不低于90％外，其他标准应符合 GB 4143-2008的要求。性控冻精输精妊娠的母牛其母犊出生率应不低于90%. 4. 2保存 性控冷冻精液应浸泡在液氮生物容器中的液氮中贮存，液氮生物容器应符合GB/T 5458-1997的有 关规定。应定期检查生物液氮容器中的液氮量，当液氮量减少时应及时补充，始终保证液氮液面高于冷 藏物品3cm-5cm。包装好的性控冻精由一个液氮容器转换到另一液氮容器时，在液氮容器外停留时间 DB13/ T 1213- 2010 不得超过5s0 4. 3运输 性控冷冻精液应浸泡在液氮生物容器中的液氮中运输，液氮生物容器应符合GB/T 5458-1997的有 关规定。运输过程中应避免液氮生物容器剧烈震动、倾斜和与其他物体碰撞。 5性控冻精授精母牛的选择 5. 1受配母牛应选择中、高产奶牛及其后代。 5. 2选择健康、膘情适中、体况良好、繁殖机能正常且无繁殖疾病史的未妊娠母牛。 5.3首选初配母牛和三胎内的经产母牛，以15-20月龄，体重达370kg以上的青年母牛最佳。 6性控冻精的输精操作 6. 1母牛发情鉴定 母牛的发情鉴定按NY/T 1335-2007的规定执行。 6. 2输精准备 输精准备按NY/T 1335-2007的规定执行。 6. 3解冻 性控冻精的解冻方法按GB4143-2008的规定执行。 6.4输精时间的确定 6.4. 1触摸卵泡法 通过直肠检查触摸卵泡。在卵泡壁薄、满而软、有弹性和波动感明显接近成熟排卵时输精一次；之 后6h-10h再次进行检查，若卵泡仍未破裂，再输精一次。 6.4. 2外部观察法 观察母牛的发情表现，母牛接受爬跨后8h-12 h是适宜输精时间。如采用两次输精，第二次输精 时间为母牛接受爬跨后14 h-22 h。青年母牛的输精时间宜适当提前。 6. 5输精方法和操作要领 6.5. 1采用直肠把握输精法。输精人员一手五指并握，呈圆锥形从肛门伸进直肠，动作要轻柔，在直 肠内触摸并把握住子宫颈，使子宫颈把握在手掌之中，另一手将输精器从阴道下口斜上方约35。一450 角向里轻轻插入阴门前庭段后，略向前下方进入阴道宫颈段，双手配合；输精器头对准子宫颈口，在通 过子宫颈横行、不规则排列中褶时，可用改变输精器前进方向、回抽、摆动、滚动等操作技巧，使输精 器前端通过子宫颈。插进后过子宫颈口螺旋状皱壁3 cm-4 cm到达输精部位。 6.5.2一头母牛应使用一支输精器。注入精液前略后退约0. 5 cm，把输精器推杆缓缓向前推，通过细 管中棉塞向前注入精液。 DB13/ T 1213- 2010 6. 6输精部位 输精部位一般在排卵侧子宫角深部，或是两侧子宫角。 6 . 6 . 2 如果能够准确判断出排卵侧并能使输精器前端顺利到达排卵侧子宫角就采用子宫角深部输精， 否则，采用子宫体输精器后拉法输精，保证两侧子宫角都能有精子进入。 6.6. 1 6. 7输精后的妊娠检查和未妊牛处理 6.7.1输精后的妊娠检查 性控冻精人工授精后的妊娠检查，按NY/T 1335-2007的规定执行。 6.7. 2输精后未妊牛的处理 参配母牛在输精后的第一或第二情期观察到了明显的发情表现，经直肠检查确认未妊娠，应及时用 普通冻精进行重复授精；如果发现发情黏液不干净或有其他繁殖疾病，要停止输精并采取相应的治疗措 施，待疾病痊愈发情表现正常后再进行人工授精。 6. 8注意事项 6.8. 1使用性控冻精配种时，配种时间尽量控制在排卵前6h之内。 6.8.2使用性控冻精时，尽量缩短解冻与输精之间的时间，应解冻一支输一支。 6.8. 3从液氮罐中取性控冻精时，提漏中的冻精不可超过液氮罐口，如果l0s内还没有将性控冻精取 出，应将性控冻精立刻沉入液氮中然后再提到罐口重复操作；单支性控冻精取出后在空气中先停留55 左右，然后放入38℃一40℃温水中l0s后取出用干脱脂棉擦干后剪断封口，装入输精器准备输精。 6.8.4输精时要保证输精器的无菌和与输精器接触的部位及器具的干净卫生。 6.8.5输精器前端插入子宫颈口时的动作要求轻、稳、准，应尽量避免创伤子宫颈和子宫引起出血。 6.8.6在输精8h之后进行第二次直肠检查卵泡侧，对于没有排卵的参配牛只，在推断了排卵时间后 要继续适时输精。 7性控胚胎移植 7. 1供体牛的选择 7.1.1供体牛应选择遗传性能稳定，系谱清楚，生产性能优良的母牛。 7.1.2供体牛要求健康状况良好，体况中等以上，生殖系统和繁殖功能正常，无遗传和传染性疾病。 7.1.3青年母牛应在14月龄以上或达到成年牛体重70％以上；成年母牛应有一胎以上的正常繁殖史， 10岁以上的母牛一般不选作供体。 7.1.4超排处理时按NY/T 1445-2007进行操作。 7. 2供体牛人工授精 精液质量应符合GB 4143-2008的规定。人工授精使用的冷冻精液，应根据供体母牛选种选配的 要求，选择遗传性状稳定、系谱清楚、并经后裔测定验证为优良种公牛的冷冻精液。人工授精按NY/T 1335-2007的规定执行。 供体牛使用性控冻精人工授精时，按本标准第6章的规定进行操作。 7. 3胚胎采集及处理 DB13/ T 1213- 2010 胚胎采集及处理按NY/T 1445-2007中5. 3的规定执行。取得胚胎后，可应用现代生物学技术（如 免疫学方法、分子生物学方法等）对胚胎进行性别鉴别，废弃不需要的胚胎。鉴别后的性控胚胎如需要 冷冻保存和解冻，按NY/T 1445-2007中5.4的规定执行。 若授精时使用的是性控冻精，则不用进行性别鉴别。 7.4受体牛的选择 受体牛宜选择低产奶牛、本地黄牛或杂交牛。要求体型较大（体高120 cm以上），膘情适中，发情 周期正常，生殖系统无疾患。青年母牛16-18月龄以上；成母牛2-6周岁，产后2个月以上，无流产 和繁殖疾病史。 7.5性控胚胎的移植操作 进行性控胚胎移植时，受体牛的同期发情处理和具体移植操作按NY/T 1445-2007中6. 2和6.3 的规定执行，有关记录表格参考NY/T 1445-2007中的第7章。 7.6胚胎移植后的妊娠检查和未妊娠牛的处理 7.6. 1胚胎移植后的妊娠检查 按NY/T 1335-2007的规定执行。 7.6.2胚胎移植后未妊牛的处理 对胚胎移植后经检查未妊娠的母牛，下一情期应及时用冷冻精液进行人工授精。