ICS 11.220 B 41 备案号： 湖 DB42 北 省 地 方 标 准 DB42/T 792—2012 猪乙型脑炎乳胶凝集抗体检测方法 Method of the latex agglutination for the detection of antibodies against swine epidemic encephalitis 2012 - 01 - 06 发布 湖北省质量技术监督局 2012 - 03 - 01 实施 发 布 DB42/T 792—2012 目  次 前言..................................................................................................................................................................... II 引言................................................................................................................................................................... III 1 范围................................................................................................................................................................. 1 2 术语和定义..................................................................................................................................................... 1 3 实验原理......................................................................................................................................................... 1 4 实验条件......................................................................................................................................................... 1 5 实验材料......................................................................................................................................................... 1 6 样品处理......................................................................................................................................................... 1 7 实验方法......................................................................................................................................................... 2 8 结果判定......................................................................................................................................................... 2 9 注意事项......................................................................................................................................................... 2 附录 A.................................................................................................................................................................... 3 I DB42/T 792—2012 前  言 本标准按 GB/T 1.1-2009《标准化工作导则 第 1 部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。 本标准由华中农业大学提出。 本标准由湖北省农业厅归口。 本标准起草单位：华中农业大学动物医学院、武汉科前动物生物制品有限责任公司、湖北省动物疫 病预防控制中心。 本标准主要起草人：曹胜波、金梅林、陈焕春、宋念华、黄少梅、李淑云、董晓辉。 II DB42/T 792—2012 引  言 乙型脑炎（Japanese encephalitis, JE）是一种急性自然疫源性虫媒传播的人畜共患传染病，可对人 类的健康造成极大的危害，被卫生部列为乙类传染病。猪是乙型脑炎主要的传染源之一，可与蚊虫一起 形成循环传播，严重危害养猪业。国家农业部将猪乙型脑炎归于二类动物疫病。为有效预防和控制乙型 脑炎，在加强预防和免疫的同时，临床上急需一种特异、敏感、快速、便于操作的诊断方法，以用于检 测猪乙型脑炎病毒的抗体。 III DB42/T 792—2012 猪乙型脑炎乳胶凝集抗体检测方法 1 范围 本标准规定了猪乙型脑炎乳胶凝集抗体检测的方法的术语和定义、实验原理、实验条件、实验材料、 样品处理、实验方法、结果判定和注意事项等。 本标准适用于猪血清、全血和乳汁中猪乙型脑炎病毒抗体的检测。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 乳胶(latex)：泛指聚合物微粒分散于水中形成的胶体乳液。 3 实验原理 乳胶凝集试验也称间接乳胶凝集试验，是将抗原或抗体结合在聚苯乙烯乳胶微粒表面，然后与相应 的抗原或抗体作用，在电解质存在的适宜条件下，微粒发生凝集，从而观察反应的结果。 4 实验条件 4.1 实验室 实验操作宜在常温（18 ℃～25 ℃）进行。 4.2 仪器 台式低温高速离心机、微量移液器、冰箱、玻片、吸头。 4.3 人员 注意个人防护和环境保护。 5 实验材料 5.1 5.2 5.3 5.4 6 猪乙型脑炎病毒致敏的乳胶抗原：为乳白色均匀胶状液，如出现分层，使用前轻轻摇匀。 猪乙型脑炎病毒阳性对照血清。 阴性对照血清。 样品稀释液配制见附录 A。 样品处理 6.1 血清 1 DB42/T 792—2012 按常规方法采血及分离血清，血清宜清亮。 6.2 全血 用针尖刺破待检动物耳静脉，用吸头吸取血液一滴，置于载玻片上。 6.3 乳汁 按常规方法采集乳汁，经3000 r/min离心10 min，取上清液作样品。 7 实验方法 取样品(血清、全血或乳汁)、阳性对照血清、阴性对照血清、稀释液各一滴，分别置于玻片上。各 加乳胶抗原一滴，混匀并晃动1 min～2 min，于3 min～5 min内观察结果。 8 结果判定 8.1 凝集反应可能出现以下几种结果： a)“++++”：全部乳胶凝集，颗粒聚于液滴边缘，液体完全透明； b) “+++”：大部分乳胶凝集，颗粒明显，液体稍混浊； c) “++”：约 50％乳胶凝集，但颗粒较细，液体较混浊； d) “+”：有少许凝集，液体略显混浊； e) “-”：液滴呈原有的均匀乳状。 8.2 成立条件 30 sec～60 sec 内出现如下结果，试验方可成立：阳性对照样品与乳胶诊断液进行乳胶凝集反应， 应出现“++”以上凝集；阴性对照样品与乳胶诊断液进行乳胶凝集反应，应不凝集。 8.3 结果判断 30 sec～60 sec 内出现“++”以上凝集，判为阳性；30 sec～60 sec 内液滴呈原有的均匀乳状为阴性。 9 注意事项 实验过程中注意做好个人的生物安全防护措施，废弃物应做无害化处理。 2 DB42/T 792—2012 AA 附 录 A （规范性附录） 试剂配制 A.1 样品稀释液的配制 氯化钠（NaCl ） 8.0 g 氯化钾（KCl） 0.2 g 磷酸氢二钠（Na2HPO3•12H2O） 2.9 g 磷酸二氢钠（KH2PO4 ） 0.2 g 硫柳汞 0.2 g 加蒸馏水或去离子水定容至1000 mL即可，置2 ℃～8 ℃保存备用。 B _________________________________ 3