ICS 11.220 B 41 备案号： 湖 DB42 北 省 地 方 标 准 DB42/T 794—2012 禽流感病毒免疫层析检测方法 Method of the immunochromatographic assay for the detection of avian influenza virus 2012 - 01 - 06 发布 湖北省质量技术监督局 2012 - 03 - 01 实施 发 布 DB42/T 794—2012 目  次 前言..................................................................................................................................................................... II 引言................................................................................................................................................................... III 1 范围................................................................................................................................................................. 1 2 缩略词............................................................................................................................................................. 1 3 实验原理......................................................................................................................................................... 1 4 实验条件......................................................................................................................................................... 1 5 实验材料......................................................................................................................................................... 1 6 样品处理......................................................................................................................................................... 2 7 实验方法......................................................................................................................................................... 2 8 结果判定......................................................................................................................................................... 2 9 注意事项......................................................................................................................................................... 3 I DB42/T 794—2012 前  言 本标准按 GB/T 1.1-2009《标准化工作导则 第 1 部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。 本标准由华中农业大学提出。 本标准由湖北省农业厅归口。 本标准起草单位：华中农业大学动物医学院、武汉科前动物生物制品有限责任公司、湖北省动物疫 病预防控制中心。 本标准起草人：金梅林、陈焕春、但汉并、郭学波、董晓辉、宋念华、张安定、周红波、孙小美、 李淑云、周艳君、田峰。 II DB42/T 794—2012 引  言 禽流感病毒（Avian Influenza Virus, AIV）具有易变异的特点，可通过突变获得对人的感染力和致 病能力，导致严重的公共卫生危害。为加强禽流感监测，制定了《禽流感病毒免疫层析检测方法》，本 方法具有简便、快速的优点，尤其适合基层现场使用。 III DB42/T 794—2012 禽流感病毒免疫层析检测方法 1 范围 本标准规定了禽流感病毒免疫层析检测的方法的缩略词、实验原理、实验材料、样品处理、实验方 法、结果判定和注意事项等。 本标准适用于禽类咽/鼻拭子、肛拭子、内脏组织、鸡胚尿囊液及细胞培养物中禽流感病毒的检测。 2 缩略词 下列缩略词适用于本标准。 T线：检测线 C线：质控线 3 实验原理 本方法用抗禽流感病毒核蛋白的单克隆抗体标记胶体金颗粒，以硝酸纤维素（NC）膜为载体，利 用微孔膜的毛细管作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端渗透。在移动过程中免疫金复合物会与 NC 膜表面检测线、质控线处包被的抗体发生反应，并通过免疫金的颜色显示出来。样品中含有禽流感 病毒时，在检测线和质控线位置均出现红色的条带。 4 实验条件 4.1 实验室 实验操作宜在常温（18 ℃～25 ℃）进行。 4.2 仪器 台式低温高速离心机、微量移液器、冰箱、吸头。 4.3 人员 注意个人防护和环境保护。 5 实验材料 5.1 检测卡 禽流感病毒检测试纸条装在塑料卡中制成检测卡，铝箔密封，内装干燥剂，室温或冷藏保存。检测 卡结构如图 1 所示。 1 DB42/T 794—2012 图 1 5.2 样品处理液 取 24.2 g Tris Base 和 10 mL Triton-x 100，加注射用水至 1 L,调 pH 值至 9.0，过滤除菌，无菌分装， 1 mL/管。 6 样品处理 6.1 咽/鼻拭子、肛拭子 将收集的咽/鼻拭子、肛拭子插入到含有处理液的样品管中，充分混合，使其溶解，以 12,000 r/min 离心 10 min，取上清。 6.2 内脏组织 称取组织块 0.5 g，置于匀浆器中，加生理盐水 1 mL，研磨后取出组织浸出液，然后置 2 ℃～8 ℃， 12,000 r/min 离心 10 min，取上清。 6.3 鸡胚尿囊液 鸡胚尿囊液以 12,000 r/min 离心 2 min，取上清。 6.4 细胞培养物 细胞培养物可直接用于检测或者冻融一次后检测。 7 实验方法 将检测卡置于平整台面上，取适量样品 80 μL～120 μL（约 3 滴～4 滴），缓慢滴加到样品孔中， 当看到红色液体在试纸条上移动时，放慢加样速度。整个加样过程在 1 min 内完成。加样完成后 5 min～ 30 min 内观察的结果有效。 8 2 结果判定 DB42/T 794—2012 8.1 阳性结果 在试纸条上出现两条红色的条带（T 线和 C 线）。 8.2 阴性结果 在试纸条上仅出现一条红色的条带（C 线）。 8.3 无效结果 在试纸条质控线（C 线）处不出现红色的条带。 9 注意事项 实验过程中注意做好个人的生物安全防护措施，废弃物收集后进行无害化处理。 _________________________________ 3