ICS 65.020 B 05 T / QAS 青 海 省 标 准 化 协 会 团 体 标 准 T / QAS 0 13 — 2020 枸杞中芦丁含量的测定 高效液相色谱法 2020 - 07 - 15 发布 2020 - 07 - 31 实施 青海省标准化协会 发 布 全国团体标准信息平台 T /QAS 013 — 2020 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 - 2009 给出的规则进行起草 。 本标准 由青海省标准化协会提出并归口 。 本标准起草单位 ： 青海省盐化工产品质量监督检验中心 、 青海省产品质量监督检验所 、 格尔木市食 品药品检验检测中心 、 格尔木市云朵枸杞科技有限责任公司 。 本标准主要起 草人 ： 刘宏 、 王微芝 、 赵枝刚 、 蔡林森 、 靳占军 、 马占雄 、 张凤萍 、 祁生冰 、 张淑琴 、 王茹 。 全国团体标准信息平台 T /QAS 013 — 2020 1 枸杞中芦丁含量的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了高效液相色谱法测定枸杞中 芦丁 的原理 、 试剂 、 仪器和设备 、 样品制备 、 分析步骤 、 数据处理 和精密度 。 本标准适用于枸杞 干果 中 芦丁 的测定 。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。 凡是注日期的引用文件 ， 仅注日期的版本适用于本文件 。 凡是不注日期的引用文件 ， 其最新版本 （ 包括所有的修改单 ） 适用于本文件 。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 81 70 数值修约规则与极限数值的表示和判定 3 原理 枸杞 样品用 70% 甲醇溶液超声提取 ， 提取液注入液相色谱 反相色谱柱分离 ， 用紫外检测器 或二极管 阵列检测器 在波长 360nm 处测定 芦丁 ， 以保留时间定性 ， 外标法定量 。 4 试剂 4.1 除非另有规定 ， 本法所使用试剂均为分析纯 ， 所用水为 GB/T6682 中规定的一级水 。 4.2 甲醇 ： 色谱纯 。 4.3 70%(V 甲醇 /V 水 ) 甲醇水溶液 。 4.4 芦丁标准品 ： 纯度 ≥ 98% 。 4.5 芦丁标准溶液 （ 1mg/mL ）： 准确称取 10mg 的芦丁标准物质 （ 精确到 0.00001g ）， 用 70% 甲醇溶液 定容至 10mL 。 5 仪器和设备 5.1 高校液 相色谱仪 （ HPLC ）： 配有紫外检测器或二极管阵列检测器 。 5.2 超声波清洗器 。 5.3 离心机 。 5.4 高速万能粉碎机 。 5.5 电子天平 ： 感应量 ± 0.0001g 。 5.6 微孔滤膜 ： 有机系 ， 0.45 μ m 。 6 样品制备 全国团体标准信息平台 T /QAS 013 — 2020 2 取具有代表性样品 200 g ， 用四分法将试样缩分至 100 g ， 测试前 ， 取样品 100g, 置 于 60 ℃ 烘箱中 干 燥 5h 以上 ， 然后取出样品 ， 冷却至室温后 用高速万能粉碎机粉碎 ， 置于样品 袋 备用 。 7 分析步骤 7.1 试样提取 精确称取 1 .0 g （ 精确到 0.00 0 1g ） 粉碎的枸杞样于 100mL 离心管中 ， 加 70%(V 甲醇 /V 水 ) 甲醇 水 溶液 50 mL ， 摇匀 ， 放置超声波清洗器中超声提取 5 0min （ 每 15min 震摇 1 次 ）， 取出后在 4000r/min 转速下离心 10min ， 上清液过 0.45 μ m 微孔滤膜过滤 ， 供高效液相色谱 仪 测定 。 7.2 高效液相参考条件 a) 色谱柱 ： Hypersil GOLD C18 柱 250mm*4.6mm ， 5.0 μ m ， 或相当者 ； b) 柱温 ： 30 ℃ ； c) 流动相 ： A: 甲醇 ， B:4 ％ 甲酸溶液 ， A:B=40% ： 60% ； d) 流速 :1.0mL/min ； e) 波长 :360nm ； f) 进样量 :10 μ L 。 7.3 标准曲线的绘制 用 70% 的甲醇溶液将芦丁标准溶液逐级稀释得到浓度为 0 、 5 、 10 、 5 0 、 100 、 200 μ g/mL 的标准工作溶 液 （ 见表 1 ）， 依次由低到高进样检测 ， 质量浓度 X （ μ g/mL ） 为横坐标 ， 以响应值 （ 峰面积 ） Y 为纵坐标 进行线性回归 ， 得到标准曲线回归方程 。 表 1 标准工作溶液 项目 标准溶液 （ 母液 ） 标准溶液 1 2 3 4 5 6 7 工作标准溶液浓 度 μg/mL ） 0 5 10 20 50 100 200 芦丁 1mg/mL 移取标准溶液体 积 /mL 0 0.05 0.10 0.20 0.50 1.00 2.00 7.4 测定 待测液中芦丁的响应值应在标准曲线范围内 ， 超过线性范围则应稀释后 再进样分析 ， 同时做空白实 验 。 8 数据处理 试样中芦丁含量的质量分数  ， 单位以毫克每千克 （ mg/kg ） 表示 ， 按式 （ 1 ） 计算 ： K m V c     ................................ ................................ ......... ( 1 ) 全国团体标准信息平台 T /QAS 013 — 2020 3 式中 ：  — 试样中总黄酮的含量 ， 单位为毫克每千克 （ mg/kg ）； c — 从标准曲线上查得的待测液中 芦丁 的质量浓度 ， 单位为微克每毫升 （ μ g/mL ） ； V — 试样中加入的提取液的体 积 ， 单位为毫升 （ mL ） ; m — 试样的质量 ， 单位为克 （ g ） ； K — 为稀释倍数 。 计算结果按 GB/T 8170 进行修约 ， 保留小数点后两位 。 9 色谱图 芦丁标准物质及枸杞样品中芦丁组分色谱图参见附录 A 。 10 精密度 在重复性条件下 ， 获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的 10% 。 全国团体标准信息平台 T /QAS 013 — 2020 4 A A 附 录 A （ 资料性附录 ） 芦丁色谱图 A.1 芦丁标准品色谱图见 A.1 。 图 A.1 芦丁标准品色谱图 （ 100μg/mL ） 全国团体标准信息平台 T /QAS 013 — 2020 5 A.2 枸杞样品中芦丁组分色谱图见图 A.2 图 A.2 枸杞样品中芦丁组分色谱图 ____ _____________________________ 全国团体标准信息平台